制備液相色譜技術(shù)基于樣品在固定相和流動(dòng)相之間的分配差異進(jìn)行分離。當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，由于不同組分在固定相和流動(dòng)相中的溶解度、吸附力等特性不同，它們會(huì)以不同的速度在色譜柱中移動(dòng)，從而實(shí)現(xiàn)分離，主要由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)系統(tǒng)和餾分收集器等組成。
根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。濕法裝柱是其中一種常用的裝柱方法，它可以迫使相對(duì)稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成，通常配備餾分收集器，用于自動(dòng)收集分離后的餾分。這有助于提高收集效率和純度，并減少人工操作誤差。
制備液相色譜技術(shù)以其靈活多樣、應(yīng)用廣泛和可規(guī)模化生產(chǎn)的特點(diǎn)，在化學(xué)、制藥、生物技術(shù)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。通過(guò)掌握其基本原理、選擇合適的部件、優(yōu)化裝柱方法和流動(dòng)相選擇以及有效使用餾分收集器，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的高效純化。
1.高效分離：利用色譜柱的分離能力，能夠有效地去除雜質(zhì)，得到高純度的目標(biāo)物質(zhì)。
2.靈活多樣：可以靈活地對(duì)待復(fù)雜樣品，如大分子、高極性物質(zhì)、天然產(chǎn)物、金屬離子等不同類(lèi)別樣品進(jìn)行純化，具有高度可控性和復(fù)雜性分離性。
3.應(yīng)用廣泛：不僅適用于化學(xué)分析領(lǐng)域，還廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域。
4.可規(guī)模化生產(chǎn)：可以根據(jù)需要選擇不同規(guī)格的色譜柱和設(shè)備，實(shí)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)室小樣到工業(yè)化生產(chǎn)的規(guī)模化純化。
制備液相色譜儀的測(cè)定步驟：
-根據(jù)樣品性質(zhì)和分析目的選擇合適的填料(如正相或反相填料)和色譜柱。
-準(zhǔn)備合適的流動(dòng)相，通常是溶劑或溶液的混合物，并根據(jù)需要過(guò)濾、除氣。
-對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，如過(guò)濾、離心等，以去除懸浮物和大分子物質(zhì)。
-將選定的填料裝入色譜柱中，并確保柱填充均勻。
-用流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至柱內(nèi)無(wú)氣泡且達(dá)到平衡狀態(tài)。
-將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品通過(guò)進(jìn)樣器注入色譜柱中。
-根據(jù)化合物在固定相和流動(dòng)相之間的相互作用力差異，實(shí)現(xiàn)化合物的分離。
-利用檢測(cè)器檢測(cè)分離出的化合物，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析處理。
-使用餾分收集器收集目標(biāo)化合物，根據(jù)時(shí)間編程或檢測(cè)器信號(hào)強(qiáng)度自動(dòng)觸發(fā)收集。
-對(duì)收集到的餾分進(jìn)行進(jìn)一步分析和鑒定，如純度檢測(cè)、結(jié)構(gòu)確認(rèn)等。
